На полотне небольшого размера изображена женщина средних лет, в темной накидке (по мнению историков – признак вдовства), сидящая вполоборота. Как на других портретах Итальянского Возрождения у Моны Лизы отсутствуют брови и выбриты волосы на верхушке лба. Скорее всего, модель позировала на балконе, так как видна линия парапета. Считается, что картина немного обрезана, в оригинальный размер виднеющиеся позади колонны входили полностью.

Считается, что композиция картины – эталон портретного жанра. Она написана по всем законам гармонии и ритма: модель вписана в пропорциональный прямоугольник, волнистая прядь волос созвучна с полупрозрачной вуалью, а сложенные руки придают картине особую композиционную завершенность.